Autoradiographie

AUTORADIOGRAPHIE

Estimation du cycle cellulaire par autoradiographie

L'autoradiographie consiste à détecter l'incorporation de thymidine tritiée dans le DNA cellulaire.

On met en culture les cellules (ou on injecte l'animal) avec une dose traçante de thymidine tritiée. On prépare de fines sections de la tumeur sur une lame microscopique. On recouvre (dans le noir) la lame d'une émulsion photographique, qu'on maintient ainsi pendant 1 à 4 semaines dans des boites étanches à la lumière. Les particules b émis par le tritium n'ont qu'un court trajet (environ 0,5 m m), et activent seulement les grains d'argent immédiatement sus-jacents aux noyaux cellulaires en phase S (c'est-à-dire ceux qui incorporent la thymidine).

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Schéma de la technique de l’autoradiographie. Les boites de pétri ou les lames sont incubées pendant environ 4 semaines dans le noir.

On peut ainsi compter le nombre de cellules marquées : c'est l'index de marquage. (ou labeling index).

Schéma de la technique d’autoradiographie.

Un autre index utile est celui des mitoses : index mitotique. Cependant, comme la durée de la phase S est bien plus longue que la phase M, l'index de marquage est plus intéressant. On peut étudier aussi le nombre de mitoses marquées, puisque ce sont celles qui sont consécutives au marquage par le tritium.

Fraction de croissance

Dans un tissu normal, seule une petite fraction de cellules se multiplient.

Les tumeurs comprennent aussi des cellules non cancéreuses : fibroblastes, macrophages du tissu de soutien, mais aussi cellules différenciées, qui ne se divisent pas

On appelle fraction de croissance la proportion de cellules qui prolifèrent. L'étude des mitoses marquées et/ou celle de l'index de marquage permettent de faire une approximation de cette fraction. Une autre méthode utilisée fréquemment consiste à révéler des marqueurs de prolifération et la cytométrie de flux

Perte cellulaire

La présence de zones importantes de nécrose tumorale et la capacité des cellules cancéreuses à métastaser, suggère une importante perte cellulaire, soit par nécrose, soit par départ de la tumeur primitive.

Le facteur de perte cellulaire est égal à 1 pour les tissus en équilibre (les tissus normaux) et à 0 pour les tumeurs sans pertes cellulaires. Pour calculer le facteur de perte, on utilise le temps de doublement potentiel de la tumeur (T_pot), ou temps de doublement de la tumeur s'il n'y avait pas de pertes cellulaires.

Le T_pot est essentiellement calculé par cytométrie de flux, selon l'équation, où LI représente l'index de marquage et Ts le taux de cellules en phase S, et l une constante :

LI=lTs / Tpot

Les valeurs de T_potsont plus courts que les valeurs de doublement, indiquant une perte cellulaire importante