Aide à la conception des protocoles pré-analytiques et analytiques sur les cytomètres, aide aux passages des échantillons, aide à l’exploitation des résultats, formations sur le principe de la cytométrie en flux et sur l’utilisation des cytomètres en fonction des demandes.
Contacts
L’équipe
- Responsable : Laurent POULAIN
- Technicienne de recherche et de formation : Marilyne GUILLAMIN
Activités
Les domaines de recherches concernés sont très variées : la cancérologie, la biologie marine, la toxicologie, les neurosciences ou la microbiologie par exemple.
Les échantillons sont analysés directement sans marquages spécifiques pour des analyses morphologiques (Taille, Granulosité) et des comptages cellulaires : analyse de population d’algues, analyse d’échantillons de pollen, comptage de spores fongiques.
D’autres analyses sont réalisées après utilisation d’un ou plusieurs marqueurs spécifiques comme des intercalants ou des marqueurs spécifiques de l’ADN (cycle cellulaire, ploïdie, réplication ADN…), des clusters de différenciation CDs (analyses immunologiques), des sondes de rétention ou d’exclusion (viabilité et mort cellulaire), des sondes spécifiques (radicaux libres, prolifération cellulaire, taux de transfection) ou l’utilisation de billes marquées (phagocytose, étude des cytokines). La sensibilité des appareils de cytométrie permet également l’analyse de microparticules (environ 100 nm).
Après vérification des paramètres des cytomètres avec des billes de calibrations, les échantillons en suspension sont analysés selon les paramètres désirés. Les résultats sont exprimés en histogrammes mono ou bi-paramétriques.
Moyens techniques
Cytomètre Analyseur Gallios (Beckman Coulter)
Equipé de 3 lasers (Bleu: 488 nm ; Rouge: 633 nm et Violet: 405 nm) ; carrousel de 32 tubes ; détection de la taille FS (selon 3 angles possibles: 0.4 à 40 µm), de la granulosité SS et jusqu’à 10 fluorescences simultanément (FL1 à 5 pour le laser Bleu, FL6 à 8 pour le laser Rouge, FL9 et 10 pour le laser Violet), analyse sur 4 décades des signaux.
Matériel acquis en 2011.
Cytomètre Analyseur CytoFlex S (Beckman Coulter)
Equipé de 4 lasers (Bleu : 488 nm ; Jaune : 561 nm ; Violet : 405 nm et le Near UV : 375 nm) ; détection de la taille FS, de la granulosité SS et de 12 fluorescences simultanément (2 sur le Bleu, 4 sur le Jaune, 4 sur le violet et 2 sur le Near UV), analyse des microparticules (granulosité VSSC sur le violet ; à partir de 100 nm), analyse sur 7 décades des signaux, mesure directe en valeur absolue (volume prélevé connu), configuration modulable.
Matériel acquis en 2017.
Logiciels de ré-analyses des données de cytométrie
- CytExpert,
- Kaluza,
- FCS 6 Express.
Ces logiciels permettent de présenter les résultats de cytométrie de différentes manières (graphique mon ou bi-paramétriques, analyse du cycle cellulaire par phases, calcul de la répartition des cellules en diverses générations…).
Autres matériels de laboratoire
- une centrifugeuse (24 tubes 15ml ou 6 tubes 50ml),
- une micro-centrifugeuse (24 tubes de 1ml ou 2ml),
- une étuve,
- un PSM,
- un CellMacs Dissociator,
- un agitateur programmable thermostaté,
- un bloc thermostaté (+4°C à +100 °C).
Quelques applications
Populations de populations : Micro-algues en fonction des différences de fluorescences naturellement émises dans un échantillon d’eau de mer (FL3 et 4) ou ensemble de pollens. (mélange P2)
Analyse de microparticules sur le CytoFlex S avec le détecteur V-SSC :
Analyse immunologiques des sous-populations lymphocytaires :
Analyse du cycle cellulaire et de la ploidie :
Analyse des micro-noyaux :
Analyse de division sur différentes générations :
Partenaires
Au niveau régional :
- Equipes de Recherche de la SF ICORE, ANSES (Dozulé), Cyceron, LARIA…
Au niveau national :
- C-Ris Pharma (35)